實驗步驟

用去離子水或蒸餾水將1瓶洗液全部稀釋至500ml。樣本稀釋：
取400ul生理鹽水于于塑料試管中，再加10ul樣本混勻。陰、陽對照已經1：40稀釋可直接使用。加樣：每孔加2滴樣本稀釋液，分別加10ul陰、陽對照和稀釋過的樣本於各自孔中，留一孔作空白對照。放置37℃溫浴反應45分鐘。從37℃取出後甩干，用稀釋的洗滌液洗板四次，每次靜置片刻，然後在面巾紙上拍干。加酶：搖勻後每孔加2滴或100ul酶結合物，空白孔不加。放置37℃溫浴反應30分鐘。洗板同上，拍干。

顯色：每孔先加顯色液A一滴，然後加顯色液B一滴，置37℃溫浴避光顯色10分鐘。每孔加一滴終止液終止反應。肉眼判定不終止。

結果判斷

目測法：無色或很淺的蘭色為陰性，蘭色為陽性。比色法：空白孔調零，在波長450nm下分別測定各孔的OD值。檢測結果有效性：陰性對照平均A值≤陽性對照平均A值≥檢測結果有效。否則應重複實驗。重複檢驗結果仍無效時，說明操作系統誤差或試劑盒失活，確定原因後再實驗。陰、陽性判定：

Cutoff值 = 0.2 +陰性對照值

（陰性對照值低於0.05以0.05計算）

凡樣本值大於Cutoff值為陽性

注意事項

試劑應放在2-8℃保存，用前恢復至室溫。不同批號不能混用。

3.未用完的板條和酶標記物冷凍保存為好，但不能反覆凍融。其它未用完的試劑可以冷藏保存。

新手教學

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