【產品名稱】
通用名稱:HTM藥敏試驗瓊脂平板(HTM)
商品名稱:HTM瓊脂平板
英文名稱:HaemophilusTest Medium
【預期用途】
適用於嗜血桿菌的紙片擴散法藥物敏感試驗。
【檢驗原理】
在瓊脂培養基表麵塗抹接種上細菌,然後貼上一定含量抗微生物藥物的紙片,再在特定條件下經過孵育。由於紙片中所含抗微生物藥物對細菌不同程度,不同圓形紙片周圍會出現直徑大小不同的圓形的無菌生長區域——稱為“抑菌圈”。量取抑菌圈直徑(㎜),對照實驗室所參照的判讀標準,得出被測細菌對被測抗微生物藥物的藥物敏感試驗結果是“敏感”、“中介”還是“耐藥”。
【檢驗方法】
- 1. 試驗應嚴格遵守無菌操作, 防止微生物污染;
- 2. 接種物製備——直接菌落懸液法
1) 從孵育18h~24h的瓊脂平板(應選用非選擇性培養基如血瓊脂)上挑取數個單個菌落,直接在3ml的生理鹽中水製成菌懸液;
2) 調整懸液的濁度使其相當於0.5麥氏濃度[(1~2)×108CFU/mL]。肉眼觀察,應在足夠的光線下貼靠著有黑白相間粗線條的比色卡與0.5麥氏濃度標準管進行比較。
- 3. 接種平板
1) HTM藥敏試驗瓊脂平板(HTM)的準備:35℃±2℃孵箱,平板正放,皿蓋半開,放置約20min~30min,使其恢復至室溫並使瓊脂表麵冷凝水乾掉;
2) 調整好懸液的濁度後最好在15min內將無菌棉簽浸入懸液內。緊貼試管內壁在液體上方旋轉拭子數次,除去棉簽上多餘的液體;
3) 用拭子橫劃線接種整個表麵乾燥的瓊脂表麵;然後再旋轉平板約60o,再次用拭子橫劃線接種;如此兩次,亦即從3個方向(60o)用棉簽劃線接種瓊脂表麵,以確保每次接種均勻分佈,最後在瓊脂平板的邊緣塗抹一圈;
4) 蓋子可半開3min~5min,以使瓊脂吸收表麵多餘的水分,在15min內貼完藥敏試驗紙片。
- 4. 紙片在已接種的瓊脂平板上的位置
1) 將預先設定的一組抗菌藥物紙片分置在已接種細菌的瓊脂表麵,每個紙片必須壓下以確保與瓊脂表麵完全接觸,無論是單獨放置的紙片或有紙片分配設備,紙片必須分佈均勻,兩紙片之間圓心的距離不少於24㎜。90㎜的平板放置不超過5個紙片。最好是在預期的產生小的抑菌環的紙片(例如:慶大黴素或萬古黴素)旁邊放置產生大的抑菌環的紙片(如頭孢菌素類)以避免重疊區。註意紙片距離瓊脂邊緣的距離同樣重要,無論有多少紙片,如果紙片放置得太靠近瓊脂的邊緣(≥10㎜),一些藥物的抑菌環可能會不完整,由於一些藥物幾乎是瞬間擴散的,一旦紙片與瓊脂表麵接觸,就不能再移動,如位置不佳可在瓊脂的另一個位置重新放置一個紙片;
2) 在放置好紙片後15min內倒置瓊脂板並將它放置在(35℃±2℃)的孵箱中。
- 5. 平板的判斷
1) 經過16h~18h的孵育後,檢查每個平板。如果平板的塗佈令人滿意,接種正確,由此產生的抑製圈是均勻的圓形,並會有融合生長的菌苔。如果可見單個菌落,說明接種量過稀,必須重復試驗。測量完全抑製區的直徑(由肉眼來判斷),包括紙片的直徑。測量抑菌環至最接近的整毫米數,采用遊標卡尺或尺子在培養板的背麵測量。將培養板放在一個黑色不反光的背景上並用反射的光照射。
2) 沒有肉眼可見的明顯的生長區即可認為抑製圈邊緣。 在抑菌環邊緣的隻能在放大鏡下觀察到的微小菌落的生長可以忽略不計。
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