1 概述
呋喃它酮是一種人工合成的硝基
呋喃類抗菌藥物，對大腸桿菌、沙門
氏菌、真菌、原蟲等有很好的殺滅效
果。呋喃它酮進入動物體內很快分解，
其代謝物亦有致癌、致畸等作用。美
國、歐盟、日本和中國等均禁止呋喃
它酮用於食品動物。呋喃它酮代謝物
（AMOZ）酶聯免疫試劑盒具有方便、
靈敏等特點，適用於大批量樣品篩查。
2 原理
樣品中的呋喃它酮代謝物經衍生
化後與酶標板上固定的抗原特異性競
爭抗體，加入酶標記物，催化顯色，
根據顯色的深淺來判斷樣品中呋喃它
酮代謝物的含量。顯色深，含量少；
顯色淺，含量多。
3 組份
???????????????? 標準品工作液：6瓶，1.5 mL/瓶，
濃度為 0 ppb、 0.05 ppb、 0.15 ppb、
0.45 ppb、 1.35 ppb、 4.05 ppb（已將
NP-AMOZ換算成 AMOZ濃度）
???????????????? 呋喃代謝物四合一高濃度標準品：
每種藥物 24 ng（8× 3 ng/孔）
???????????????? 酶標板：1塊（8孔× 12條）
???????????????? 酶標記物工作液：1瓶（7 mL）
???????????????? 抗體工作液：1瓶（7 mL）
???????????????? 50 mM鄰硝基苯甲醛（75.55 mg）
???????????????? 濃縮樣品稀釋液： 1瓶（ 4×， 30 mL）
???????????????? 濃縮洗滌液：1瓶（20×，25 mL）
???????????????? 底物 A液、 底物 B液各 1瓶（ 7 mL）
???????????????? 終止液：1瓶（7 mL）
???????????????? 說明書
???????????????? 蓋板膜
???????????????? 自封袋
4 需要而未提供的設備和材料
4.1 設備
???????????????? 酶標機（檢測波長 450 nm，參考波
長 630 nm）
???????????????? 均質器
???????????????? 天平（精度：0.01 g）
???????????????? 漩渦振蕩器
???????????????? 溫箱（可控溫度：37℃、60℃）
???????????????? 離心機（4000 g）
???????????????? 氮吹機
???????????????? 微量移液器
???????????????? 計時器
4.2 試劑
???????????????? 乙酸乙酯（分析純）
???????????????? 正己烷（分析純）
???????????????? 二甲基亞砜或 N,N-二甲基甲酰胺或
甲醇（分析純）
???????????????? 1 M HCl：量取 8.6 mL濃鹽酸，加
去離子水定容至 100 mL。
???????????????? 0.1 M K2HPO4：稱取 11.4 g K2HPO4•3H2O，
加 400 mL去離子水溶解並定容至 500 mL。
???????????????? 緩沖溶液：500 mL 0.1 M K2HPO4
溶液中加入 100 g NaCl，充分溶解備用。
???????????????? 1 M NaOH：稱取 4 g NaOH，用去
離子水溶解並定容至 100 mL。
註：1 M NaOH配製後的使用時間建議不超
過一周，最好現用現配。
???????????????? 化學式名稱備註：
HCl：鹽酸
NaCl：氯化鈉
NaOH：氫氧化鈉
K
2
HPO
4
:磷酸氫二鉀
K
2
HPO
4
•3H
2
O：三水合磷酸氫二鉀
5 貯存
???????????????? 試劑盒貯存於 2-8℃，切勿冷凍，
有效期 1年。
???????????????? 未使用完的酶標板條應密封，
2-8℃保存。
6 註意事項
???????????????? 使用試劑盒前，仔細閱讀說明書。
???????????????? 不要使用過期試劑盒，不同批號試
劑盒中的試劑不得混用。
???????????????? 試劑盒使用前，需將試劑盒內各組
份置於實驗臺上，待其恢復至室溫
（25± 2℃） （提示：約 2 h） ，方可使用。
???????????????? 實驗前，應預先開啟恒溫培養箱調
至所需溫度，並用溫度計檢查恒溫
培養箱溫度是否正常。
???????????????? 應避免使用金屬類物質盛裝和攪拌試劑。
???????????????? 各試劑在使用前請搖勻。
???????????????? 檢測時，應盡量減少板孔上方空氣流動。
???????????????? 終止液中含有 2 M 硫酸，使用時
防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
???????????????? 不同標準品、樣品所用吸頭不得混
用，否則會影響實驗結果。
???????????????? 混合試劑時應避免出現氣泡。
???????????????? 使用後請立即將試劑放回 2-8℃保存。
7 工作液準備
7.1 50 mM 鄰硝基苯甲醛：向裝有
75.55 mg鄰硝基苯甲醛的試劑瓶
中加入 10 mL二甲基亞砜（也可
選用 N,N-二甲基甲酰胺或甲醇）
溶解，濃度為 50 mM。
7.2 樣品稀釋液：用去離子水按 1:4
（1份濃縮樣品稀釋液+3份去離子水）稀釋。
7.3 洗滌工作液：用去離子水按 1:20
（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）稀釋。
7.4 呋喃代謝物四合一高濃度標準
品：每孔加入 300 μL去離子水溶
解，即得濃度為 10 ng/mL（10
ppb）的高濃度標準品工作液。
註：高濃度標準品工作液包含呋喃西林代謝
物、呋喃妥因代謝物、呋喃唑酮代謝物、
呋喃它酮代謝物四種藥物，每種藥物濃
度均為 10 ppb。需現溶現用，按量取用。
未使用的微孔密封後於 2-8℃儲存。
8 樣品前處理
8.1 羊腸衣（稀釋系數：2）
a) 準確稱取 1± 0.01 g均質後的組織
樣品於 50 mL離心管中；
b) 未用鹽醃製過的羊腸衣樣本直接
按步驟 d）處理；
c) 醃製過的羊腸衣：加入 20 mL去
離子水，渦動 1 min， 4000 g以上，
離心 5 min，棄去上清液，繼續按
照步驟 d）處理；
d) 依次加入 4 mL去離子水、0.5 mL
1 M HCl（見 4.2）、 80 μL 50 mM鄰
硝基苯甲醛（見 7.1） ，劇烈渦動 1 min；
e) 60℃溫箱孵育 1.5 h；
f) 依次加入 5 mL緩沖溶液（見 4.2）、
400 μL 1 M NaOH（見 4.2）和 6 mL乙酸乙酯；
g) 劇烈渦動 1 min；
h) 4000 g以上，離心 10 min；
i) 取 3 mL上清液於新的離心管中；
j) 50-60℃水浴中，氮氣吹乾；
k) 加入 2 mL正己烷，再加入 1 mL
樣品稀釋液（見 7.2），高速渦動 30 s；
l) 4000 g以上，離心 5 min；
m) 完全棄去上層正己烷及中間層雜質；
n) 取 50μL進行檢測。
9 檢測
9.1 將所需的酶標板條插入酶標板架
上，並記錄下各標準品和樣品的
位置，建議均做平行實驗，未使
用的酶標板條用自封袋密封後，
立即保存於 2-8℃環境中；
9.2 將 50 μL各標準品工作液/樣品溶
液分別加入對應的標準品/樣品孔中；
9.3 在每孔中加入 50 μL酶標記物工作液；
9.4 在每孔中加入 50 μL抗體工作液；
註：標準品/樣品、酶標記物工作液、抗體工
作液一定要按順序加樣！
9.5 蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板 10 s，
充分混勻，室溫下（25± 2℃） ，避
光反應 30 min；
9.6 揭開蓋板膜；
9.7 倒掉板孔中液體，在每孔加入 260
μL洗滌工作液，充分洗滌 4次，
每次浸泡 15-30 s；
9.8 倒掉板孔中液體，將酶標板倒置
於吸水紙上，拍乾；
9.9 立即在每孔中加入 100 μL A、B混合液；
註：底物 A液、底物 B液按體積 1:1混合，
必須充分混勻，混合液在 5 min內使用，
避免使用金屬盛裝、攪拌試劑！
9.10 蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板
10 s，充分混勻，室溫下（25± 2℃），
避光反應 10-15 min；
9.11 揭開蓋板膜，在每孔中加入 50 μL
終止液，輕輕振蕩酶標板 10 s，充分混勻；
9.12 用酶標機在雙波長 450 nm、630
nm下讀取檢測吸光度，結果在終
止後 5 min內讀取。
10 計算
???????????????? 各標準品（或樣品）的平均吸光度
值，除以零標（濃度為 0 ppb的標
準品）吸光度值，乘以 100，可以
得到各標準品（或樣品）對應的吸
光度的百分比。
???????????????? 將各標準品所得值輸入半對數系
統中，對應各標準品濃度可以擬合
標準曲線。
???????????????? 將樣品吸光度的百分比代入標準
曲線，可得出樣品對應的濃度，再
乘以相應樣品的稀釋倍數，方得樣
品實際藥物含量。
11 特異性
呋喃它酮代謝物酶聯免疫試劑盒
的特異性是通過與相應的物質進行
交叉反應試驗來確定的，結果如下：
NP-AMOZ……………………100%
AMOZ、NP-SEM、SEM、NP-AHD、
AHD、NP-AOZ、AOZ………<0.1%
註: AMOZ-呋喃它酮代謝物； SEM-呋喃西林
代謝物；AOZ-呋喃唑酮代謝物；AHD-
呋喃妥因代謝物。
12 試劑盒參數
???????????????? 本試劑盒靈敏度 0.05 ppb，標準曲
線范圍為 0.05 ppb-4.05 ppb。
???????????????? B0吸光度最佳值應大於 0.8。
???????????????? 試劑盒吸光度板內誤差小於 5%，
板間誤差小於 10%。
???????????????? 用本說明書提供的樣品處理方法
回收率 90%± 30%。
???????????????? 樣品最低檢測限：
羊腸衣…………………約 0.5 ppb
註：ppb=ng/mL或 ng/g
批發市場僅提供代購諮詢服務，商品內容為廠商自行維護，若有發現不實、不合適或不正確內容，再請告知我們，查實即會請廠商修改或立即下架，謝謝。
