ABI Prism®7000型熒光定量基因擴增機機器標準操作規程 

一、機器開/關機程序

1、開機程序

1.1 打開電腦，進入桌麵。

1.2 打開ABI-7000機器正麵的電源開關。

1.3 雙擊桌麵上的軟件圖標，進入軟件的主菜單。

2、關機程序

2.1 保存數據，退出軟件的主菜單。

2.2 關掉電腦，關閉ABI-7000機器正麵的電源開關。

二、程序文件的設置及打開

1、實驗程序已預先設定

1.1 此時隻需點擊任務欄上的新建 ，在彈出的對話框“New document Wizzard”中，點擊“Browser”，找到相應的程序文件，單擊打開。

1.2 回到對話框“New document Wizzard”後，點擊“完成”即可。

2、創建新的程序文件

2.1 點擊任務欄上的新建 ，在彈出的對話框“New document Wizzard”中，直接點擊“完成”。

2.2 單擊任務欄下的“Instrument”頁麵，進入程序編輯界麵，輸入相應的溫度、時間、重復的循環數（Reps），以及反應體系（Sample Volume）,並可根據具體情況增加或刪除步驟（Cycle和Step）。

2.3 另外7300須在“Data Collection”的下拉菜單中選擇熒光收集的時間點。

2.4 編輯完成後，點擊任務欄上的“File”下拉菜單，選擇“Save As...”,在彈出的對話框中選擇保存文件的路徑，輸入文件名，並在“保存類型”的下拉菜單中選擇“SDS Templates（*.sdt）”，單擊保存。

三、機器操作程序

1、編輯樣本

1.1 將裝有反應液的PCR反應管放入PCR機，記錄樣本擺放順序。

1.2 點擊任務欄下的“Setup”頁麵，利用Shift鍵和Ctrl鍵選擇相應的孔位，

1.3 點擊任務欄上的 ，進入“Well Inspector”對話框，點擊“Add Detector”，進入“Detector Manager”對話框。

1.4 如檢測所需的“Detector”預先已有設定，隻需選擇相應的“Detector”,單擊“Add to Plate document”,回到“Well Inspector”對話框,打鉤即可。

1.5 若是第一次實驗，則需創建新“Detector”，在“File”下拉菜單中點擊“New”，在“New Detector”對話框中輸入名稱，選擇熒光報告基團（Reporter Dye）和熒光粹滅基團（Quencher Dye），點擊OK完成創建，回到“Detector Manager”對話框。選擇相應的“Detector”,單擊“Add to Plate document”,回到“Well Inspector”對話框,打鉤即可。

1.6此時輸入相應孔位的樣本名稱，樣本屬性（Task），如標準品，則在“Quantity”中輸入相應數值，在“Passive Reference”中選擇所需的參比熒光；完成後，點擊“close”退出。

2、 運行

2.1 進入“Instrument”頁麵，單擊 。

2.2 輸入需保存的數據文件名，保存（SDS文件），點擊“Start”。

3、數據分析

3.1單擊 ，找到需分析的數據文件，點擊打開。

3.2在“results”界麵下，點擊“amplification plot”，選中所有樣本和標準。

3.3按照基線調整原則調整基線，點擊“analyze”，點擊“standard curve”，看相關系數R2的絕對值是否在0.98以上，點擊“plate”,可以看到各標本的值，打印即可。