磺胺類多殘留ELISA檢測試劑盒
一、概要
磺胺類（SAs）藥物在畜牧生產中應用十分廣泛，主要在動物疾病防治方麵有顯著的療效，但與此同時，這類藥物顯著的毒副作用也引起瞭人們的廣泛關註。例如：影響泌尿系統功能，引起結晶尿，血尿，等反應及致癌性作。因此國內外對動物性食品中總磺胺以及單個磺胺的的最高限量做瞭規定。HPLC或GC-MS一直用作檢測的方法，但是其前處理步驟費用昂貴；而使用酶聯免疫檢測試劑盒方法則可以經濟、快速地檢測。 本公司生產的磺胺類ELISA試劑盒具有準確、快速、簡便的操作優勢。
二、試驗原理
本試劑盒采用間接競爭法。酶標板上包被的抗原與加入的標準品（或樣本）中的抗原競爭結合加入的酶標抗體。多餘的酶被洗去後，加入的底物在酶催化下反應，試劑呈藍色，加入終止液後呈黃色，在450nm下有最大吸光值，其吸光值大小與標品（或樣本）中的磺胺多殘留藥物濃度呈反比，通過標準品濃度的對數--吸光值百分比做曲線讀取樣本濃度。
三、適用范圍
可定性、定量檢測肉類、水產、蜂蜜、尿液等樣本中磺胺多殘留藥物的殘留量。
四、交叉反應率
磺胺甲噻二唑……………………………………………100 %
磺胺嘧啶…………………………………………………110 %
磺胺噻唑 ………………………………………………＞300%
酞酰磺噻唑（PST） ……………………………………89.8%
磺胺甲惡唑……………………………………………＞150%
磺胺異惡唑……………………………………………＞150%
磺胺吡啶 ……………………………………………… 55%
磺胺苯吡啶………………………………………………62%
磺胺間甲氧嘧啶 ………………………………………95%
磺胺對甲氧嘧啶……………………………………… 85%
磺胺間二甲氧嘧啶…………………………………… 67%
磺胺氯噠嗪 ……………………………………………75%
其它個別磺胺類藥物也存在交叉……………………＜50%
五、檢測步驟測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之後立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決於洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置於室溫（20～25℃）平衡30min以上，註意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存於2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，並記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5 加標準品/樣本：加標準品/樣本20l/孔到對應的微孔中，然後加入磺胺多殘留的抗試劑80l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩乾，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍乾（拍乾後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標物：加入磺胺多殘留的酶標物100l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應30min，取出重復洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置25℃避光環境中反應15～20min。
9、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標機於450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標機，則不加終止液用目測法可進行判定)。
六、註意事項
1、室溫低於20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍乾後應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為1M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過瞭有效日期的試劑盒；也不要使用過瞭有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過瞭有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件 保存試劑盒於2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小於0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液後，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min（或更長），但不得超過30min。反之，則減短反應時間。
9、該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
七、貯藏條件及保存期 貯藏條件：保存試劑盒於2~8℃。保存期：該產品有效期為12個月。
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