糞大腸菌群快速檢驗紙片（水質15管法）
BD105Ⅰ 水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片 1份/包 適用於湖水、水源水中大腸菌群的快速檢測。
BD105Ⅱ 水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片 1份/包 適用於河水、生活用水、醫療機構處理後排污水、禽畜養殖業等排放廢水中大腸菌群的快速檢測。
分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ兩個型號，請註意選擇型號。
1、適用范圍 水質（糞）大腸菌群的測定 紙片快速法
本標準適用於地表水、生活污水、醫療機構及禽畜養殖業等其他行業排放的廢水中（糞）大腸菌群的快速篩查。
本方法的檢出限為20MPN/L。
2、規范性引用文件
本標準內容引用瞭下列文件或其中的條款。凡是不註明日期的引用文件，其有效版本適用於本標準。HJ/T91地表水和污水監測技術規范
3、術語和定義
下列術語和定義適用於本標準。
3.1總大腸菌群（total coliforms）
在37℃培養，24h內能發酵乳糖酸產氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。
3.2 糞大腸菌群（fecal coliforms）
44.5℃培養，24h內能發酵乳糖產酸氣的總大腸菌群，屬糞行來源，稱為糞大腸菌群。
4、方法原理
將一定量的乳糖、指示劑（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及營養成分等吸附於一定麵積的無菌濾紙上，當細菌生長繁殖時，產酸使PH值降低，溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色。同時，產氣過程相應的脫氫酶在適宜的PH范圍內，催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臢（TTF），即可在產酸後的黃色背景下顯示出紅色斑點（或紅暈）。通過上述指示劑的顏色變化就可對是否產酸產氣作出判斷，從而確定是否有（糞）大腸菌群存在，再通過查MPN表就可得出相應（糞）大腸菌群的濃度值。
5、試劑和材料
除非另有說明，分析時均使用符合國傢標準的分析純化學試劑。
5.1市售水質總大腸菌群、糞大腸菌群測試片：10ml水樣量紙片按附錄A的方法進行質量鑒定，達到要求後方可使用。
5.2無菌水
用新制備的去離子水或蒸餾水，按無菌操作要求，121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。
5.3硫代硫酸鈉溶液：ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml
稱取硫代硫酸鈉10g，溶於適量蒸餾水（或去離子）中，稀釋至100ml，現配。
5.4乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液：ρ(C10H14N2O8Na2。 2H2O)=0.15g/ml
稱取EDTA-Na2 15g,溶於適量蒸餾水（或去離子水）中，稀釋至100ml，此溶液保質期為30d。
6、機器和設備
6.1 恒溫培養箱：37℃±1℃。
6.2 恒溫培養箱：44℃±0.5℃。
6.3 高壓蒸汽滅菌器：121℃、101.3kpa。
6.4 冰箱：0-4℃
6.5 移液管：1±0.01ml、10±0.1ml。
6.6 試管：φ15mm×150mm.
6.7 采樣瓶：500ml。
註1：移液器、試管、采樣瓶等玻璃器皿實驗前要按無菌操作要求包紮，121℃高壓蒸汽滅菌20min，烘乾，備用。
7、樣品
用滅菌器具，按照HJ/T 91的規定及無菌操作的要求，采集水樣400ml放入已滅菌的采樣瓶中。如果是經加氯處理的廢水，需在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液（5.4）1.2ml，以消除乾擾。酸性樣品，需調節胖胖的PH值至7.0-8.0。
采樣後2h內檢測，否則，需10℃以下冷藏並6h內送檢，實驗室接樣後，應將樣品放入0-4℃冰箱並2h內測定。
註2:10mg硫代硫酸鈉可保證去除水樣中1.5mg餘氯，硫代硫酸鈉用量克根據水樣實際餘氯量調整。
8、分析步驟
8.1接種量
每個樣品按三個不同的接種量接種，每個接種量分別接種5張紙片，共接種15張紙片。
根據水樣的污染程度確定接種量，應盡可能使5個接種量最大的紙片為陽性、5個接種量最小的紙片為陰性。
清潔水樣的參考接種量分別為10 ml、1 ml、0.1 ml，受污染水樣參考接種量根據污染程度可接種1 ml、0.1ml、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等。
接種量小於1ml時，水樣應制成稀釋樣品後使用。接種量為0.1ml、0.01 ml時，分別制成1:10稀釋樣品、1:100稀釋樣品。其它接種量的稀釋樣品依次類推。
1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1ml水樣，註入盛有9 ml無菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。其它稀釋度的稀釋樣品同法制作。
8.2接種、培養
水樣充分混勻，按無菌操作制作稀釋水樣及接種水樣。
清潔水樣，接種水樣總量為55.5ml，10 ml水樣量紙片5張，每張接種水樣10ml，1 ml水樣量紙片10張，其中5張各接種水樣1ml，另5張各接種1:10的稀釋水樣1ml。受污染水樣，接種3個不同稀釋度的1ml稀釋水樣各5張。
接種水樣應均勻塗佈於紙片上，紙片充分侵潤、吸收水樣，用手輕輕壓平，做好標記。
測總大腸菌群時，在37±1℃的條件下培養18-24h後觀察結果；測糞大腸菌群時，在44.5±0.5℃的條件下培養18-24h後觀察結果。
註3：
1、檢測糞大腸菌群時，紙片接種後應立即放置於44.5±0.5℃的恒溫培養箱中培養，在常溫下放置過久將影響檢測結果的準確性。
2、紙片加入水樣後，短時間內變黃或退色，表明水樣存在酸性物質活氧化劑乾擾，需按“7樣品”一節方法去除相應乾擾。
9、結果判定
（1）紙片上出現紅斑或紅暈且周圍變黃，為陽性。
（2）紙片全片變黃，無紅斑或紅暈，為陽性。
（3）紙片部分變黃，無紅斑或紅暈，為陰性。
（4）紙片的紫色背景上出現紅斑或紅暈，而周圍不變黃，為陰性。
（5）紙片無變化，為陰性。
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