*孔徑的選擇
如果溶質分子量小於5000,則選擇小孔徑(60-120A)填料,否則,應選用300A孔徑的填料柱。
粒徑的選擇
高效液相柱填料粒徑一般是5um,現在方法開發主要采用3.5um及更小的色譜柱。如果需要進行快速分析或更高分離度分析,可以使用1.8um和2-3um粒徑的填料。采用這些填料的色譜柱越短,越可能獲得更快速的高分離度分離,1.8um填料的粒徑具有最高的柱效,2.7um表麵多孔填料能提供類似結果。選擇1.8、2.7、3.5和5um填料粒徑,從最小粒徑開始進行HPLC或UHPLC分析—400bar或1200bar,以獲得最好的結果。
*色譜柱柱形
在過去的幾年中,選擇最佳色譜柱規格進行方法開發已發生巨大變化。現在更常使用的是3.0mm內徑或2.1mm內徑柱,而不是4.6mm內徑柱,應為其溶劑用量較少,而且能與MS檢測器兼容。較短的50、75和100mm長的色譜柱可能是良好的起始選擇,隻有當需要更高分離度或使用3.5和5um粒徑色譜柱時才使用長柱。
*矽膠類型和鍵合相
1)基本材料
液相柱的基本材料采用最高純度的全多孔矽膠填料,與大多數安捷倫ZORBAX柱中使用的填料一樣。當然也有更多選擇,包括在高PH下穩定的聚合物材料(常用於PLRP-S柱)和表麵多孔矽膠填料(Poroshell 120柱使用)。高純度B型矽膠,包括ZORBAX Eclipse Plus中使用的ZORBAX Rx-Sil和表麵多空Poroshell 120,為大多數方法的首選。A型矽膠,如ZORBAX Sil,用於早期的ZORBAX柱,仍在生產並為許多方法所用。
2)鍵合相
鍵合相的首選材料為C18或C8,建議起始色譜柱選擇Eclipse Plus C18或Poroshell 120 EC-C18.這兩種色譜柱能提供出色的峰型,能在PH2-9范圍使用,並適用最通用的LC和LC/MS流動相。如果目標樣品溶質在這類色譜柱上沒有完全分離,CN和苯基柱—包括苯基,苯基已基和二苯基柱--可以提供與直鏈烷烴顯著不同色選擇性,而對分離產生影響。
3)PH值和流動相
對於反相系統流動相的選擇。應首先考慮有機改性劑的選擇。乙腈是最常用的有機改性劑。使用含乙腈、甲醇和四氫呋喃(THF)流動相的選擇性和樣品保留有明顯區別。這些溶劑對樣品的溶解性可能不同,需要使用指定溶劑。某些改性劑不能在某些波長下進行UV檢測(如甲醇在200nm下)。
常用規格訂貨信息:
貨號 | 填料 | 粒徑(µm) | 內徑*柱長 (mm) | 使用說明 |
880975-902 | SB-C18 | 5 | 4.6×250 |
•堿性、酸性、中性化合物 •在低PH值(最低到1)下罕見的穩定性 ·可在高溫(對C18柱,90℃;對C8、C3、苯基和氰基柱,60℃)和低PH值下使用以作為增加靈敏度和手段 ·為達到不同的選擇性可以最廣泛地選擇鍵合相(對C18、C8、C3、苯基和氰基) ·對LC/MS可用甲酸或TFA作 為流動相 ·對肽類和蛋白質的分離可用TFA作為流動相
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883975-902 | 4.6×150 | |||
884950-567 | 3.5 | 4.6×250 | ||
863953-902 | 4.6×150 | |||
861953-902 | 4.6×100 | |||
880975-906 | SB-C8 | 5 | 4.6×250 | |
883975-906 | 4.6×150 | |||
863953-906 | 3.5 | 4.6×150 | ||
861953-906 | 4.6×100 | |||
880975-905 | SB-CN | 5
| 4.6×250 | |
883975-905 | 4.6×150 | |||
863953-905 | 3.5 | 4.6×150 | ||
861953-905 | 4.6×100 | |||
880975-912 | SB-Pheny1 | 5
| 4.6×250 | |
883975-912 | 4.6×150 | |||
863953-912 | 3.5 | 4.6×150 | ||
861953-912 | 4.6×100 | |||
880975-914 | SB-AQ | 5
| 4.6×250 | |
883975-914 | 4.6×150 | |||
863953-914 | 3.5 | 4.6×150 | ||
861953-914 | 4.6×100 | |||
820888-901 | 保護柱硬件組件 | |||
880995-902 | 300SB-C18 | 5 | 4.6×250 | |
883995-902 | 4.6×150 | |||
863973-902 | 3.5 | 4.6×150 | ||
861973-902 | 4.6×100 | |||
880995-906 | 300SB-C8 | 5 | 4.6×250 | |
883995-906 | 4.6×150 | |||
863973-906 | 3.5
| 4.6×150 | ||
861973-906 | 4.6×100 | |||
880995-905 | 300SB-CN | 5 | 4.6×250 | |
883995-905 | 4.6×150 | |||
990967-902 | XDB-C18 | 5 | 4.6×250 |
·ZORBAX Eclipse XDB色譜柱是為在寬的PH范圍(PH2-9)獲得堿性酸性和中性化合物良好的峰形而設計的 ·高純矽膠 ·超密鍵合和雙封端保證瞭長壽命 |
993967-902 | 4.6×150 | |||
963967-902 | 3.5 | 4.6×150 | ||
961967-902 | 4.6×100 | |||
990967-906 | XDB-C8 | 5 | 4.6×250 | |
993967-906 | 4.6×150 | |||
963967-906 | 3.5
| 4.6×150 | ||
961967-906 | 4.6×100 | |||
990967-912 | XDB-苯基 | 5 | 4.6×250 | |
993967-912 | 4.6×150 | |||
963967-912 | 3.5 | 4.6×150 | ||
990967-905 | XDB-CN | 5 | 4.6×250 | |
993967-905 | 4.6×150 | |||
963967-905 | 3.5 | 4.6×150 | ||
961967-905 | 4.6×100 | |||
880952-704 | SCX | 5 | 4.6×250 | SCX(300A)陽離子交換柱 |
883952-704 | 4.6×150 | |||
880952-703 | SAX | 5 | 4.6×250 | SAX(70A)陰離子交換柱 |
883952-703 | 4.6×150 | |||
770450-902 | Extend-C18 | 5 | 4.6×250 | ·在高於其PKa的條件下以自由堿的形式分離堿性化合物;在高PH下分離堿性、酸性和中性化合物;PH可高達11.5 ·用LC/MS分離小分子或肽類時右用氫氧化銨作流動相 ·為改變選擇性,可用於高中低PH 下進行分離 |
773450-902 | 4.6×150 | |||
773700-902 | 2.1×150 | |||
763953-902 | 3.5 | 4.6×150 | ||
763600-902 | 1×150 |
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