一、產品用途
金黃色葡萄球菌腸毒素分型檢測試劑盒用於檢測食品樣品中的金黃色葡萄球菌腸毒素A,B,C,D,E。此試劑盒隻能用於定性檢測，不能用於定量檢測。
二、原理
金黃色葡萄球菌腸毒素分型檢測試劑盒采用的是三明治酶免疫分析方法（酶聯免疫吸附法）。微孔A-E和H分別包被針對SET A,B,C,D,E的特異性抗體，微孔F和G作為陰性質控孔，包被與SET沒有交叉反應的抗體（見下圖）。樣品中的腸毒素A,B,C,D,E分別與包被相對應的特異性抗體發生反應後，再與另一種特異性酶標抗體發生結合，然後通過TMB底物顯色，樣品的吸光度值與腸毒素含量呈正相關。   

三、檢測靈敏度
    0.25ppb—1ppb
四、組成

五、設備、試劑
┅┅天平（感量0.01g）
┅┅冷凍離心機
┅┅酶標機450nm/630nm
┅┅旋渦振蕩器
┅┅磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉
┅┅10%次氯酸鈉溶液
┅┅去離子水
六、溶液的配製
1．0.02M PBS溶液（pH7.4）
稱取NaH₂PO₄·H₂O 0.55g（或NaH₂PO₄·2H₂O 0.62g ）、Na₂HPO₄·2H₂O 2.85g（或Na₂HPO₄·12H₂O 5.73g）、NaCl 8.7g溶於1000 mL去離子水中，充分溶解混勻即可。
2．洗滌工作液
用去離子水將濃縮洗滌液(10×)按1:9體積比進行稀釋，即：1份濃縮洗滌液(10×)+9份去離子水；用於酶標板的洗滌，洗滌工作液在4 ℃環境可保存一個月。
七、檢測步驟
測定前須知：
1．使用之前將所有試劑和需用微孔條的溫度回升至室溫（20～ 25℃）。
2．使用之後立即將所有試劑放回到所需的保存溫度。
3．ELISA數據的再現性很大程度取決於洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4．在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板，避免液體濺到蓋板膜上，一旦污染蓋板膜，需更換。
5．檢測過程中吸取不同試劑和溶液時及時更換槍頭，用過的槍頭及廢液要浸泡到10%次氯酸鈉溶液中過夜，再進行清洗。
八、樣品前處理步驟：
1．牛奶樣品
取10-25 mL液體牛奶樣品於15 ℃3500 g離心10 min；棄去上層脂肪，取下層脫脂乳100 μL用於檢測。
2．肌肉樣品
稱取2 g絞碎後的樣品，加入3 mL 0.02M PBS溶液，於旋渦振蕩器振蕩1 min至樣品分散，再放於搖床劇烈震蕩10 min，15 ℃ 3500 g離心10 min，取100 μL上清液用於檢測。
九、檢測步驟：
1．將所需試劑從冷藏環境中取出，置於室溫（20～25℃）平衡30 min以上，註意每種液體試劑使用前均須輕輕顛倒混勻。
2．取出需要數量的微孔板，（一個樣品需要一列八個微孔）將不用的微孔放入自封袋，保存於2～8 ℃。洗滌工作液在使用前也需回溫。
3.   加樣：A-G孔分別加入樣品100 mL，H孔加100 μL陽性質控品，將蓋板膜貼於微孔表麵後置室溫（20～25℃）避光環境中反應30 min。
4．洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩棄，用洗滌工作液250 mL/孔，充分洗滌4次，每次間隔10 s，在吸水紙上拍乾（拍乾後未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破，戳破時切勿碰觸微孔壁）。
5．加酶標物：每孔加入酶標物100 mL/孔，輕輕振蕩混勻，將蓋板膜貼於微孔表麵後置室溫（20～25 ℃）避光環境中反應30 min。取出，重復洗板步驟5。
6．顯色：每孔加入底物A液50 mL/孔，再加底物B液50mL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板後置室溫（20～25 ℃）避光環境中反應15～20 min。
7.   測定：加入終止液50 mL/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標機於450 nm處（建議用雙波長450/630 nm檢測，請在5 min內讀完數據），測定每孔OD值。
十、結果判定
陰陽性質控孔需滿足下麵的條件：
陰性質控孔：450nm/630nm下讀數低於0.3
陽性質控孔：450nm/630nm下讀數高於0.5。
如果不能同時滿足以上條件，實驗需重做。
每一列微孔的的F和G孔是陰性質控孔，兩個陰性質控孔OD值的平均值加上0.15為閾值（T）。
即：閾值（T）=(NC1+NC2)/2+0.15
如果樣品吸光值高於或等於閾值，則結果為陽性，表示樣品中檢測出某型金黃色葡萄球菌腸毒素。如果樣品吸光值低於閾值，則結果為陰性，表示樣品中未檢測出金黃色葡萄球菌腸毒素。
十一、陽性結果確認
1．陽性結果需要確認樣品分離出的金黃色葡萄球菌的產腸毒素的特征。參照金黃色葡萄球菌腸毒素的表麵培養。
2．需要註意的是在加熱或物理處理過程中造成細菌死亡，但腸毒素依然存在於樣品中。也就是說樣品可能對腸毒素顯示陽性，但對金黃色葡萄球菌可能顯示陰性。
3．註意：樣品中具有相似性質的物質，如由金黃色葡萄球菌分泌的蛋白質A、內源過氧化物酶和其他內源性物質都可能對結果產生交叉影響。
十二、註意事項
1．反應溫度低於說明書中規定的反應溫度或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有微孔的OD值偏低。
2．在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況，則會出現重復性不好的現象。所以洗板拍乾後應立即進行下一步操作。
3．每加一種試劑前需將其搖勻。
4．反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5．不要使用過瞭有效日期的試劑盒及試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過瞭有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6.   儲存條件
      避免反復凍融，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7．試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。
8．樣本不能含有疊氮鈉(NaN₃)，因為其會抑製辣根過氧化物酶（HRP）活性。
十三、保存期
該產品有效期為12個月。

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